значительный объем выполненных работ, сегодня в мире, а в нашей стране в особенности, ощущается острая потребность в эффективных методах профилактики болезни. С учетом этого наши исследования по ВВК, проводимые совместно с Государственным научным центром вирусологии и биотехнологии "Вектор" (г. Новосибирск), направлены на разработку средств и методов неспецифической и специфической иммунопрофилактики болезни.

Неспецифическая иммунопрофилактика достигается обработкой рыб иммуностимуляторами. Они активируют естественную резистентность рыб, повышая на определенный срок их устойчивость к заболеванию. Для испытания были отобраны два препарата РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae, не имеющие аналогов за рубежом и разрешенные в отечественной ветеринарной практике - ридостин и полирибонат. В экспериментах на модели ВВК у карпа препараты значительно снижали заболеваемость и гибель, растягивали течение болезни, увеличивая продолжительность выживания больных рыб. Защитное действие было слабо выражено у личинки и возрастало до 80-100% у годовиков и более старших рыб. Высокий уровень защиты достигался уже спустя 2-3 дня после обработки, постепенно снижаясь в последующие 2-3 месяца. Потенцирующие агенты усиливали действие препаратов. Установлен диапазон эффективных дозировок и предложены методы для индивидуальной (инъекции) и массовой (гиперосмотическая инфильтрация) обработки рыб (Shchelkunov et al., 1994; 1995, Alikin et al., 1996). Определено влияние препаратов на выработку рыбами интерферона, комплемента и лизоцима, продукцию антител к вирусу ВВК (Shchelkunova et al., 1998). При этом у обработанных рыб наблюдали снижение обсемененности внутренних органов условно патогенной микрофлорой (Юхименко и др., 1996). Определена стратегия использования препаратов в промышленных условиях, которая предполагает проведение обработки весной при температуре воды 8-13°С, что позволяет защитить рыбу на период наибольшего риска возникновения заболевания. Первые положительные результаты получены при производственных испытаниях препаратов (Щелкунов и др., 1997). Способ профилактики оказался эффективным и при вирусной геморрагической септицемии лососевых рыб и в 1995 г. был запатентован в России.

Работы по специфической иммунопрофилактике ВВК посвящены созданию с помощью технологии рекомбинантных ДНК высокоэффективной вакцины и разработке нетрудоемких способов вакцинации против заболевания. Создававшиеся в предыдущие годы традиционные вакцины против ВВК оказались несостоятельными, и сегодня коммерческие вакцины против данной болезни отсутствуют. Современные генная инженерия и молекулярная биотехнология позволяют конструировать вакцины с заданными свойствами, преодолевая недостатки, присущие традиционным вакцинам.

В ходе исследований был создан и испытан в экспериментах на рыбах ряд прокариотических и эукариотических рекомбинантных конструкций, несущих вставку полного или почти полного гена иммунопротективного гликопротеида (G-гена) американского изолята вируса. Анализ полученных результатов позволил сделать выбор в пользу экспериментальной ДНК-вакцины - плазмиды со вставкой целевого гена под контролем эукариотического CMV-промотора. После инъекции рыбам эта вакцина обладала наилучшим иммуногенным и протективным действием, тогда как защитное действие прокариотической конструкции, полученной в клетках Е. coli, было слабым и нестабильным (Shchelkunov et al., 2001).

К настоящему времени созданы и испытываются в экспериментах на рыбах две модификации отобранного прототипа ДНК-вакцины. Первая из них представляет собой вышеупомянутую плазмиду, в которой G-ген американского изолята вируса заменен на аналогичный ген отечественного референтного штамма ЗЛ4. Вторая