Криоконсервации остается одним из наиболее привлекательных и быстроразвивающихся направлений сохранения редких исчезающих видов животных. Наличие в криобанке генетически репрезентативных коллекций геномов рыб и маточных стад на осетровых рыбоводных заводах позволит с максимальным эффектом сохранить генетическое разнообразие этих ценных промысловых объектов.

  Существующие в настоящее время методики криоконсервации спермы осетровых рыб имеют общие, объединяющие их подходы к замораживанию, хранению и оттаиванию образцов, а также и целый ряд нюансов, отличающих каждую методику друг от друга.

  В качестве общего методического приема необходимо признать, что разработанная общая методика замораживания биологических объектов, к которым относят и сперму рыб, полученная на достаточном материале, имеет свои отработанные приемы, которые нередко приводят к положительным результатам. Однако до сих пор не удается получить достаточно стабильные результаты криоконсервации спермы осетровых рыб, которые разнятся из года в год, и зависят от рыбоводного завода, на котором берется материал, от физиологического состояния производителей и рядя других причин.

  Одним из «узких мест» методик криоконсервации являются объемы образцов спермы, предназначенных для консервации, а также режимы их замораживания-оттаивания.

  В задачу исследования входило экспериментально установить влияние выше указанных факторов на качество исследуемого материала. Для ее реализации необходимо было разрешить следующие вопросы:
  1. Какие режимы замораживания и оттаивания оказывают наименьшее повреждающее действие на сперму осетровых рыб.
  2. Какие объемы и формы емкостей являются наиболее приемлемыми для получения
качественной спермы.

  Сперму для замораживания получали на осетровых рыбоводных заводах Астраханской области в период рыбоводного сезона. Качество нативной и дефростированной спермы устанавливали по принятым показателям стандартным методом. В качестве криопротекторов использовали состав смеси на основе ДМСО и базового раствора.

  Для проведения исследования был применен экспериментальный план - латинский квадрат 3x3 с дисперсионным анализом. За факторы принимали следующие скорости замораживания: 3°/мин., 10°/мин. и ступенчатый (3°/мин в течение 4 минут, затем 10°/мин. в течение 10 минут), после чего погружали образцы со спермой в жидких азот.

  За блоки взяты объемы спермы с криопротектором: I мл, 2 мл, контейнер 5 мл.
  За латинские буквы: режимы оттаивания: А - в воде, В - в сушильном шкафу при t =37°, С - в микроволновой печи на минимальном режиме.
311

  Достоверность различий между влиянием исследуемых воздействий устанавливали с помощью F-критерия Фишера.

  Эксперимент поведен в одну серию опытов, которая реализована в три повторности.
  После статистической обработки и анализа результатов по значениям коэффициентов регрессии построены ранжированные ряды влияния каждого из факторов на качество дефростированной спермы русского осетра (рис. 1 а-в).

Рис. 1а. Влияние скорости замораживания на качество спермы русского осетра.

Из рисунка 1а видно, что достоверно меньшие повреждения сперматозоиды получают при скорости замораживания 3 градуса/минуту. Скорость заморозки 10 град/мин, оказалась менее эффективной, а ступенчатый режим криоконсервации при данных условиях занимает последнее место в ранжированном ряду замораживания при оценке качества размороженной спермы.

Рис. Рис. 1 б. Влияние объема образца при криоконсервации на качество спермы русского осетра.

Объемы и форма емкостей для замораживания материала также имеют значение для сохранения спермиев после двойного температурного шока. На рис. 16 видно, что сперма русского осетра при глубокой заморозке достоверно лучше сохраняется в специально изготовленных контейнерах, объемом 5 мл, чем в ампулах Эпендорфа, несмотря на существенно больший объем. А в последних цилиндрической формы, объемом 2 мл. Спермин продемонстрировали лучшее качество, чем в ампулах конической формы, хотя и меньшего объема. Очевидно, что площадь контейнера и его конфигурация выгодно отличаются от цилиндрической и конической формы.

Рис. 1в. Влияние режима разморозки на качество спермы русского осетра.

Режимы оттаивания имеют немаловажное значение для сохранения целостности замороженного биологического материала. Из рисунка 1в можно видеть, что оттаивание образцов в сушильном шкафу, проходящее в течение 3 минут значимо отличается от режима, осуществляемого в воде при одинаковом времени. СВЧ излучение не дало ожидаемого результата.

  Таким образом, из проведенного исследования, можно заключить, что при глубокой заморозке спермы русского осетра с использованием состава криопротектора на основе ДМСО и базового раствора наиболее оптимальными оказались следующие режимы криоконсервации: скорость замораживания - 3°/мин., режим оттаивания 3 минуты в сушильном шкафу, объем 5 мл в контейнере специальной конструкции.